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LUMTECH Sin-QuEChERS 改良QuEChERS方法,特定的吸附材料,实现“一步净化”多残留。


品牌:LUMTECH

名称:LUMTECH Sin-QuEChERS TEA  茶叶专用净化柱(112-9669-362)


LUMTECH  Sin-QuEChERS TEA 茶叶专用柱,采用特定的吸附材料,能够有效去茶叶中的色素、茶多酚等干扰物,获得优异的净化效果,保证结果准确性和重现性,得到更好回收率。

适用于茶叶中有机磷、有机氯、氨基甲酸酯类残留测定,样品制备时间仅需10分钟。


订货信息

  应用

名称

规格

货号

农残净化专用柱(茶叶专用)

LUMTECH  Sin-QuEChERS TEA

112-9669-362

 30支/盒

中药农残净化柱

LUMTECH Sin-QuEChERS Herb

112-9669-367

  30支/盒

农残净化专用柱(简单基质)

LUMTECH  Sin-QuEChERS Nano 

112-9669-360

   30支/盒

农残净化专用柱(如韭菜类、菠菜类等)

LUMTECH  Sin-QuEChERS Nano 

112-9669-361

   30支/盒

动物源性和油料(复杂基质)样品兽药残留分析

LUMTECH Sin-QuEChERS Fat

112-9669-365

30支/盒

适用于AOAC2007.01方法/盐析(茶叶、中药,部分兽药残留)

LUMTECH QuEChERS盐析包/萃取盐包  

112-9670-110

   50支/盒

适用于EN 15662方法/盐析(果蔬农残)

LUMTECH QuEChERS盐析包/萃取盐包

112-9670-112

   50支/盒

兽药残留(复杂基质)专用盐析

LUMTECH QuEChERS盐析包/萃取盐包

112-9670-111

30支/盒


联系方式

北京绿绵科技有限公司

TEL:010-82676061/2/3/4/5/6/7转207分机

E-mail:bin_qu@lumtech.com.cn 

QQ:1014125976

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糖类化合物HPLC测定方案

发布时间: 2019-04-10 10:05 来源: 北京绿绵科技有限公司

下载地址: 糖类化合物HPLC测定方案


摘要

碳水化合物的分析检测是很多产品的质控指标,选择合适的HPLC方法可使碳水化合物的分析变得简单、快速。其中色谱柱和检测器的选择是方法建立的两个关键因素,决定了碳水化合物分析的分离条件以及该条件下适合的检测对象。

前言

碳水化合物种类繁多,分子大小差异也很大,有小分子的单糖,也有几千几万的聚糖甚至几百万的多糖。另外每种糖都有许多异构体。这些复杂的结构给碳水化合物的分析检测带了一定的困扰。本文参照德国KNAUER公司利用AZURA液相系统采用不同检测器对蜂蜜中糖含量的分析研究,分别从色谱柱和检测器的特性及选择方案为需要建立碳水化合物HPLC分析方法的研究者提供可行性的参考方案。

色谱柱的选择

色谱柱,色谱分离的核心,不同类型色谱柱直接决定了碳水化合物的分离效果。分离碳水化合物常用的色谱柱有:氨基柱、糖分析柱(聚合物基质柱)、凝胶柱和C18柱。这些色谱柱分离原理和分离条件不同,所以有着不同的分离效果,适应不同的分析对象,详见下表。

 碳水化合物常用分析色谱柱


色谱柱

分离原理

常用流动相

方法建立

分析对象

凝胶柱

分子排阻

水/缓冲盐

简单

多糖、高聚糖

氨基柱

HILIC(反反相)

乙腈/水

较复杂

单糖、二糖、低聚糖

糖分析柱

配位体交换

可直接用水

简单

单糖

C18

反相

不限

需柱前衍生

单糖

1.       凝胶柱

图片.png

样品进入凝胶柱后,在一定孔径的凝胶颗粒中扩散,按照分子筛效应,大分子较快洗脱出小分子较慢洗脱出来。由于这样的分离原理,限制了相同或相近分子量的碳水化合物不能实现很好分离,所以凝胶柱常用于大分子的多糖或者高聚糖的分离检测。

 

2.           C18

C18柱,实验室最常见色谱柱,价格低廉,使用注意事项少。碳水化合物一般易溶于水,极性较高,所以在C18柱上没有很好的保留。但是可以通过衍生化提高碳水化合物的疏水性,搭配紫外检测器,就可以使用C18柱进行分析检测。

3.       氨基柱

图片.png

氨基柱在分析碳水化合物时采用的是HILIC模式,这样的分离模式决定了氨基柱比较适合较小分子糖的分离,可适用于分离同时含有单糖、二糖、三糖等不同聚合度的混合糖分子的样品。氨基柱的键合相氨丙基易水解,所以氨基柱的使用寿命较短,使用注意事项相对较多。酸性或高比例水相条件会加速水解,因此氨基柱应避免在酸性或者高水相的流动相中使用。当样品显酸性的时候,可在流动相中略微添加少许氨来提高氨基柱柱效和寿命。

4.       糖分析柱

图片.png

糖分析柱简称糖柱,采用苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为基质,金属离子对为官能团,二者通过磺酸基键合作为填料。分离时,低交联度的树脂允许糖的透过,并且按尺寸大小进行分离表现为尺寸排阻作用,同时碳水化合物上的羟基与树脂的金属对离子形成结合体而被保留,表现为配位体交换作用。由于这种特殊的分离机制决定了糖柱更擅长分析单糖,对于结构复杂、分子量大的碳水化合物分离效果稍差。德国诺尔糖分析柱特殊工艺不仅可以适用于聚合度小于8的糖分析,还可适用于糖醇及有机酸类物的分析检测。

糖柱分离条件简单,样品制备工作量小,可直接使用水洗脱,因此糖柱很容易建立分离糖类物质的方法。但是糖柱特殊的基质所以使用时常需要较高柱温(60~80℃),一般液相柱温箱只能达到65℃,而诺尔AZURA系统液相的柱温箱可达到85℃,无需额外配置柱温箱就可达到所需色谱条件进行糖检测,非常简便快速。

检测器的选择

碳水化合物本身没有很好的发色基团,无法直接使用常规紫外检测器,只能使用通用性检测器比如RID、ELSD或者柱前衍生化后采用紫外检测器进行检测。

1.       柱前衍生紫外检测

图片.png


柱前衍生紫外检测是利用具有强紫外吸收的物质对多糖完全水解后产生的单糖成分进行衍生,然后通过C18柱和紫外检测器对其衍生物进行分离检测,工作量较大,这种方法的优点是紫外检测器在检测单糖衍生物可以达到比RID和ELSD检测糖时更低的检测限(LOD),同时该法更适合对由多种单糖组成比较复杂的酸性杂多糖分析,分离模式多样,对实验条件要求不高,分离效果重现性好。缺点是衍生化条件的建立及操作较繁琐。

2.       示差折光检测器

图片.png


示差折光检测器(RID)是一款通用型检测器,其原理是连续检测样品流路与参比流路间液体折光指数的差值。不需要对糖进行特别处理就可以直接检测,不受糖的修饰类型及分子量大小等条件限制。检测条件简单,只需要检测池温度稳定(各生产厂家工艺不同,稳定性各有差异,推荐使用KNAUER示差折光检测器,),不需对检测器检测参数进行过多的摸索。

由于RID特殊的检测原理,流动相的成分也会有明显的折光响应,改变流动相成分会影响样品池与参比池折光率差值,因此RID不能使用梯度洗脱。一般搭配能够在等度洗脱条件下可实现很好分离效果的色谱柱,比如糖分析柱。 RID使用之前必须用流动相对参比流路进行冲洗平衡,诺尔的RID相比其他厂家的RID只需一小时就能快速将参比池平衡好进行测定。总体来说,使用RID分析糖的优点是样品前处理简单、方法建立简单,分析种类不限,缺点是该检测器对多数物质的灵敏度低,通常不用于痕量分析;受环境温度、流动相组成等波动的影响较大,不适合梯度洗脱。

3.       蒸发光散射检测器

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与示差折光检测器相同,ELSD也是通用型检测器。不同于紫外和荧光检测器,ELSD的响应不依赖于样品的光学特性,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测,不受其官能团的影响。样品前处理简单。因为是去溶剂检测,所以ELSD可用于梯度洗脱,但是流动相中不可以含有不挥发的缓冲盐。水相比例高的流动相汽化比较困难,会使基线噪音增大,导致分析灵敏度降低。所以常搭配氨基柱来进行检测分析。

图片.png


综合来说,ELSD灵敏度较高(图1,ELSD与RID响应值对比图,诺尔提供)、样品前处理简单、分析种类广。确定是方法建立比较困难,容易产生废气对人体有害。

结论

图片.png

基于诺尔采用不同检测器对蜂蜜中糖含量的分析研究(图2,ELSD测定各产品色谱图;图3,RID测定各产品色谱图),ELSD检测器虽具有更高的检测灵敏度,但是操作繁琐,线性范围窄;柱前衍生繁琐耗时长,而 RID线性范围广,可以直接对未稀释的样品进行定性分析,简便快速。同时德国诺尔示差折光检测器具有平衡时间短、基线稳定的特点,建议做糖应首选 RID。色谱柱的选择时应充分了解样品中糖的种类、聚合度等信息然后再选择合适的色谱柱进行分析检测。


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